4.5.1 與毛細管電泳相關的基本概念
電場強度、電泳淌度、遷移時間、電泳速度、電滲流、焦耳熱。
4.5.2 基本工作原理
溶液中的帶電粒子以高壓電場為驅動力,沿毛細管通道,以不同速度向與其所帶電荷相反的電極方向遷移,并依據樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現分離。
4.5.3 毛細管電泳的特點
高靈敏度、高速度、高分辨率、樣品少、易自動化、應用范圍廣。
4.5.4 毛細管電泳分離模式
毛細管電泳有多種分離模式,如毛細管區帶電泳、毛細管膠束電動色譜、毛細管凝膠電泳、等電聚焦毛細管電泳、毛細管等速電泳和毛細管電色譜等。
4.5.4.1 毛細管區帶電泳
毛細管區帶電泳(capillary zone electrophoresis,CZE)也稱為毛細管自由溶液區帶電泳,根據組分的遷移時間進行定性,根據電泳峰的峰面積或峰高進行定量分析。它適用于小離子、小分子、肽類、蛋白質的分離,在一定限度內適合于DNA 的分離。應用CZE 分離人血清中氨甲喋呤(MTX)及其代謝產物7–羥基氨甲喋呤(7–OH–MTX)。
4.5.4.2 毛細管凝膠電泳
毛細管凝膠電泳是將板上的凝膠移到毛細管中作支持物進行的電泳。適用于分離、測定肽類、蛋白質、DNA 類物質的分離。CGE 正在向第二代DNA 序列測定儀發展,并將在人類基因組計劃中起重要作用。
4.5.4.3 毛細管膠束電動色譜
毛細管膠束電動色譜又稱微團電動毛細管層析,該技術的**大特點是使毛細管電泳有可能在用于離子型化合物分離的同時進行中性物質的分離,加強了毛細管電泳的選擇項,彌補了中性分子分離方向的不足。因此在各個領域特別是生物藥物領域顯示了廣泛的應用前景。
4.5.4.4 毛細管等電聚焦電泳
毛細管等電聚焦電泳是在電場作用下,帶電的分子會在電解質中作定向的遷移,毛細管的等電聚焦是在毛細管內實現的等電聚焦過程,具有極高的分辨率,通??梢苑蛛x等電點差異小于0.01pH 單位的兩種蛋白質,例如肽類、蛋白質的分離。
4.5.4.5 毛細管等速電泳
毛細管等速電泳是一種較早采用的模式,是電泳中**的分離組分與電解質一起向前移動的同時進行分離的電泳方法。常用于分離小離子、小分子、肽類及蛋白質。
4.5.4.6 毛細管電色譜
毛細管電色譜它包含了電泳和色譜兩種機制,是在毛細管中填充或在毛細管壁上鍵合(或涂壁)固定相,從而構成毛細管色譜柱,依靠電滲流推動流動相,攜帶樣品遷移,根據樣品分子的質荷比、分子尺寸及分配系數的差別而分離。它與色譜法的不同在于,流動相通道色譜柱的推動力是電場力,而不是壓力。它與區帶毛細管電泳法的區別是具有電泳與色譜二種作用力,因此適用范圍更廣泛。
毛細管
電泳儀的結構并不復雜,主要有高壓源、毛細管柱、檢測器,以及兩個供毛細管兩端插入而又可和電源相連的緩沖液槽。輸出訊號和記錄裝置相連,記錄裝置可以是一個普通的記錄儀、積分儀,也可以是有控制功能的計算機工作站。圖6-4 是毛細管
電泳儀裝置示意圖。
圖6-4 毛細管電泳儀裝置示意圖
4.5.5.1 毛細管柱
毛細管是毛細管電泳儀的核心部件,毛細管電泳的分離過程主要在毛細管內完成。毛細管柱通常都是圓管型的,理想的毛細管柱應是化學和電惰性的,紫外和可見光可以透過,易于彎曲,有一定的柔性,耐用而且便宜。
4.5.5.2 檢測器
4.5.5.3 毛細管電泳法的進樣技術
4.5.6 常用各種電泳儀簡介
穩壓穩流電泳儀、全自動乙纖膜電泳儀、全自動熒光/可見光雙系統電泳儀、全自動瓊脂糖電泳儀、雙向電泳及雙向電泳-液相色譜-質譜聯用、高效毛細管電泳及高效毛細管電泳-質譜聯用、毛細管電泳芯片、DNA 測序系統