電泳依賴于基本過程 - 在電場中移動的粒子,或多或少。雖然已知200多年,這種現象仍然驅動許多實驗室的基本技術。盡管有著悠久的歷史,這一領域仍然圍繞著時間。但是,不是幾個世紀,研究人員現在專注于分鐘。特別地,他們希望該過程花費更少的時間 - 更少。另一方面,每個人都希望更高的精確度和更低的檢測限,都具有更高的吞吐量。
當被問及當前凝膠電泳的**大挑戰時,Life Technologies(加利福尼亞州卡爾斯巴德)的**產品經理Nikita Warner快速說,“獲得成果的時間。“她指出,凝膠上運行的核酸在約十年前從45分鐘加速到30分鐘,然后下降到僅10分鐘。“使用實時可視化,您可以在看到樂隊后立即停止運行,而且可以少于10分鐘,”她說。
凝膠電泳的長期歷史在該技術的廣泛使用中發揮一些作用。明尼蘇達大學化學工程和材料科學副教授Kevin Dorfman博士指出,用于DNA分離的凝膠電泳是“相當成熟的技術”。他說:“只要你的分離是足夠好,你可以切出樂隊。“這真的很簡單,只需要拿一把手術刀,然后逐字切除感興趣的樂隊。然而,技術的進步可以改善這種形式的電泳。例如,Dorfman指出,用于凝膠的一些市售緩沖液不像傳統的那樣加熱,并且加速了分離。
老和新
Life Technologies以色列業務和產品開發**經理Adam Sartiel說,雖然人們已經被編程為數字化觀看這些天,但電泳仍然相當古老,因為它提供了必須轉換為數字格式的模擬結果。 “即使平臺提供了數字輸出,用戶仍然希望看到頻段 - 數據的模擬版本。經驗豐富的研究人員可能會發現模擬信息有幫助,特別是在任何故障排除中。
使用電泳的老學校實際上是在運行任何凝膠之前開始的。它從開始。“大多數人仍然使用手動方法準備凝膠,”Sartiel說,“這不是精確的,不是一個校準系統。
除了一致性,安全性也在制備凝膠中起作用。關于聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE),華納指出處理有毒化學品的危險。“用瓊脂糖凝膠,”她補充說,“個人的危害不是很大。
因此,Life Technologies專家看到更多的人轉向商業制備的凝膠。Warner說,除了為用戶提供更一致,更安全的產品外,他們的凝膠還提供了更長的保質期。“當你為PAGE制作自己的凝膠時,它們**多只能持續幾個小時,”她說。作為一個例子,她指出NuPAGE凝膠具有一年以上的保質期或更長。
舊技術的新用途
一些新技術增加了凝膠電泳的使用,而下一代測序提供了一個關鍵的例子。Sartiel說:“一些測序系統需要從凝膠中提取一定大小的文庫,現在可以通過凝膠電泳快速自動完成。
電泳中的變化,例如毛細管電泳,也影響潛在的應用。正如Beckman Coulter(美國加利福尼亞州)毛細管電泳全球經理Mark Lies博士說:“分離形式可以控制毛細管內的環境,使您可以完全背對背分離不同類型的分子使用不同的測定。
根據Lies,毛細管電泳可以應用于解決許多問題。“它可以用于評估蛋白質的純度和電荷異質性或分析與這些蛋白質相關的碳水化合物,”他說。還指出,毛細管電泳可用于分析樣品中的離子群體或將對映異構體彼此分離。他補充說,“在生物制藥行業中,毛細管電泳的應用非常廣泛,可用于治療性蛋白質的自動化定量表征。生物科技公司正在指望[毛細管電泳]技術,以幫助保持其開發和商業化的單克隆抗體治療的質量控制。“他還認為這種技術用于石油化工,環境,食品和飲料,
如果研究人員想要定量精確地鑒定DNA混合物的組分,Dorfman建議使用毛細管電泳。另一方面,他提到研究人員可以建立凝膠電泳,投資小得多。
增強自動化
“毛細管電泳提供了自動化分析,因此用戶變異性**小化,”Lies說。“此外,集成軟件和電子技術控制提供精確的儀器控制,數據量化,以及符合法規要求的能力。
除了降低可變性的明顯優點之外,自動化操作提供了方法開發能力,其中用戶可以對儀器進行編程以改變分離條件。“集成軟件可以讓您控制儀器,”Lies解釋說。例如,他說:“施加電壓以產生場強和分離溫度可能影響分離。
甚**可以在毛細管電泳平臺的前端添加樣品制備平臺。“然后你獲得了運行到運行的可重復性,因為在樣品制備過程中也有**小的手動交互。
總體而言,毛細管電泳的增長能力為用戶提供了更高的分離選擇,具有高精度,準確性和穩定性。因此,該技術將開始應用于越來越多的領域中的更多類型的分析。此外,這個百年古老的概念和全新技術的組件的改進推動了這一領域的發展。